GenMute™体外siRNA转染试剂

产品简介：
GenMute™ siRNA试剂是一种新型的可生物降解的非脂质体的siRNA / miRNA和DNA的载体工具。运用我们专有的PH依赖构象变化技术，这款可生物降解的转染试剂在它的侧链上添加了预筛选出来的疏水集团，使得GenMute™试剂成为市场上最万能的最强大的基因载体工具。GenMute™试剂，已被证实能有效的，可重复性转染单siRNA片段和miRNA模拟物或共转染DNA/siRNA片段或DNA/miRNA片段到各种哺乳动物细胞中。

产品规格：
– GenMute™转染试剂，1.0ml，足够在24孔板中转染5.0 pmoles的siRNA或miRNA模拟物达到2000个反应。
– GenMute™ 转染试剂缓冲液（5X），与PGenMute™ 试剂配合使用以获得转染效率最大化，8.0ml（5X）浓缩液就可以制成40ml的工作液体。

应用：
– 对各种哺乳动物细胞的单siRNA 转染或者 DNA/siRNA 共转染。
– 对各种哺乳动物细胞的单 miRNA， miRNA模拟物 或者 miRNA抑制剂的转染或者 DNA/miRNA 或DNA/miRNA模拟物的共转染。

储存条件：
4⁰C储存。若储存合适，产品的稳定性能保持12个月以上。

特点：
– 在只有 1.0 nM siRNA / miRNA模拟物的低浓度中，也能达到非常好的沉默效应。
– 在细胞内，能将非特异性和非靶目标的影响降到最低。
– 单管反应。
– 运用于广泛的哺乳动物细胞系。
– 细胞毒性低。
– 物美价廉，非常实惠。

GenMute™ siRNA&DNA转染试剂和其他品牌产品的沉默效率的比较

GenMute™ 转染试剂(上图)和Dharmafect™ 4 siRNA转染试剂(中图)和Lipofectamine™ 2000(下图)在HEK293细胞上沉默效率的比较。siRNA抑制的海肾荧光素酶在不同的最终浓度范围（0.5~20nM）与海肾荧光素酶基因(0.5 µg pRL-CMV DNA/孔，24孔板)通过上述的三种转染试剂按照生产制造商的科学实验步骤共转染入 HEK293细胞。共转染24小时后，通过海肾荧光酶测定系统(Promega)检测海肾荧光酶的活性。通过5 µl 裂解液10s的裂解整合，运用光度计(贝克曼库尔特LD 400)测量荧光。荧光酶活性的表达检测通过超过10s相对光单位（RLU）检测和采用BCA检测标准化的每毫克细胞蛋白含量。误差来自于重复的三次实验的标准偏差。计算未处理的细胞荧光素酶沉默效应。GenMute™和Dharmafect™ 4试剂，1.0nM海肾荧光素酶能产生显著地基因沉默效应，然而 lipofectamine™ 2000只有在浓度大于30 nM的时候产生效应。 (数据没有显示)

在24孔板中，每孔加入 0.5 µl GenMute™试剂和5.0 pmol Eg5 siRNA。内源性表达基因KIF11（也称EG5）在HEK293 细胞上产生出色的沉默效应。KIF11 (也称为 Eg5)编码了一个启动蛋白，这启动蛋白属于驱动蛋白家族，参与染色体定位和细胞有丝分裂时两端的纺锤体的形成。KIF11水平降低会阻碍有丝分裂。GenMute™试剂能有效的将Eg5 siRNA (终浓度10 nM,右图)转染到HEK293中， 24孔板中每孔0.5µl和阴性对照(终浓度10 nM.左图)。转染24小时后，参考阴性对照(左图)通过尼康荧光显微镜观察圆顶表型的293细胞（右图）。

GenMute™转染试剂敲减了在Hela细胞中的内源性lamin A/C基因的表达。 一个siRNA抑制的lamin A/C基因(右图)和一个假的siRNA (左图)通过GenMute™转染试剂被转导入Hela细胞(终浓度1.0 nM) 。转染24小时后，通过免疫荧光检测Lamin A/C基因沉默效应。Lamin A/C用小鼠单克隆蛋白特异性抗体标记，接下来加入FITC标记的抗鼠抗体。定量分析表明，通过GenMute™转染试剂将1.0nM的lamin siRNA转染入Hela细胞达到94%内源性基因lamin A/C表达沉默。

Data Sheet & Protocol
– A Protocol for siRNA Transfection and DNA/siRNA Co-Tranafection
– A Protocol for miRNA Mimics Transfection and DNA/miRNA Co-Transfection
– A Protocol for DNA Transfection to Mammalian Cells